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Kamal Rai Aneja I Chetan Sharma II III I Radhika Joshi Dr (Profesor) erudito estudioso II Investigación de la infección del oído (Kurukshetra) III La investigación es una de las enfermedades más comunes que ocurren en todo el mundo. Los diferentes agentes etiológicos son responsables de las infecciones del oído. Objetivo: Evaluar el potencial antimicrobiano de las hojas de Terminalia arjuna y extractos de corteza contra Staphylococcus aureus, Acinetobacter sp. Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans. patógenos que causan infecciones del oído y su comparación con gotas para los oídos disponibles localmente. MATERIAL Y MÉTODOS: metanol, etanol, acetona, acuosas (fría y caliente) los extractos de las hojas y la corteza de T. Arjuna fueron probados por su actividad antimicrobiana. RESULTADOS: De los tres disolventes orgánicos evaluados, se encontró que el extracto de hoja de acetona para ser mejor frente a S. aureus. El extracto de corteza orgánica mostró casi igual inhibición de todas las bacterias Gram negativas ensayadas excepto P. aeruginosa. Sin embargo, el extracto acuoso de la corteza de T. Arjuna mostró buena actividad frente a S. aureus. Todos los extractos fueron incapaces de presentar ninguna actividad antifúngica. CONCLUSIÓN: extracto orgánico obtenido de la corteza Arjuna T. y hojas puede ser utilizado para tratar los patógenos bacterianos del oído especialmente S. aureus. que ha mostrado mayores zonas de inhibición que las gotas a base de hierbas, sin embargo, todavía necesitamos estudios más detallados como los ensayos in vivo y las propiedades farmacocinéticas de su utilidad terapéutica en el tratamiento de infecciones del oído. Palabras clave: actividad antimicrobiana, patógenos del oído, infección del oído extracto de planta es más común en niños que en adultos, aproximadamente 75 de los niños experimentan al menos tres o más infecciones de oído durante los tres primeros años de vida 1. La infección del oído es causada principalmente por bacterias (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli, Proteus mirabilis) y patógenos fúngicos (Aspergillus niger, A. fumigatus, A. flavus, Candida albicans) 2-5. La eficacia clínica de muchos agentes quimioterapéuticos existentes se ve amenazada por la aparición de patógenos resistentes a múltiples fármacos. Las bacterias desarrollan resistencia natural a los antimicrobianos. En los últimos años, sin embargo, el uso excesivo y el mal uso de los antibióticos ha causado un número cada vez mayor de la bacteria estafilococo a convertirse en súper bacterias causantes de enfermedades resistentes a las drogas como la meticilina, vancomicina 6-8. La creciente fracaso de agentes quimioterapéuticos y resistencia a los antibióticos exhibidos por los agentes infecciosos microbianos patógenos ha conducido a la proyección de varias plantas para su actividad antimicrobiana potencial y el desarrollo de nuevos antimicrobianos por las compañías farmacéuticas 7,9. Las hierbas están organizando una reaparición y renacimiento a base de hierbas que está sucediendo en todo el mundo y según la OMS, 80 de los mundos población depende de medicamentos tradicionales a base de plantas para sus necesidades de atención primaria 10-12. La naturaleza ha otorgado la India con una rica flora que se encuentra ampliamente distribuido. Las hierbas medicinales se han utilizado para el tratamiento y la cura de diversas enfermedades en los métodos practicados tradicionales indias como el Ayurveda, Unani y Siddha 13,14. Terminalia Arjuna Wight Arn. comúnmente llamado Arjuna (familia Combretaceae), es un árbol de hoja perenne y de hoja caduca distribuido por toda la India y también se encuentra en Birmania, Sri Lanka y Mauricio, que crece hasta una altura de 60 a 90 pies. Las hojas de Arjuna son simples, oblongas o elípticas con superficie superior de color verde claro y oscuro y pálido superficie inferior marrón. Las flores son bisexuales, sésiles y blancas dispuestas en espigas axilares cortos o en pannicule terminal. La corteza es lisa, de color gris rosáceo desde el exterior y se descascara en grandes, curvos y bastante planas piezas 15,16. La corteza y las hojas de esta planta se han utilizado en el sistema indígena de la medicina para curar diferentes enfermedades, la corteza en el tratamiento de la angina de pecho (hritshool), expectorante, antidysentric, purgante, laxante, leucoderma, la anemia, la hiperhidrosis, asthama, tumores y otros trastornos cardiovasculares 16,17 y las hojas como un remedio para el tratamiento del dolor de oído 18. la corteza posee también buena contra el cáncer, antivirales y actividades antimicrobianas 19,20. Las plantas tienen capacidad ilimitada para sintetizar metabolitos secundarios, tales como taninos, terpenoides, alcaloides, flavonoides, glucósidos y fenoles que se ha encontrado que tienen propiedades antimicrobianas 11,21,22. Las hojas y la corteza de T. arjuna contienen glucósidos de efecto cardioprotector, flavonoides que tienen propiedades antioxidantes, anti-inflamatorio, antimicrobiano (luteolina), efectos anti-cancerosas y reductores de lípidos, taninos responsables de astringente, cicatrización de heridas, antioxidante, anti cáncer, anti viral y la actividad antimicrobiana. Además de estos fitocompuestos corteza también contiene triterpenoides responsables principalmente para (ácido arjunic, arjungenin y, arjunetin) cardio protector y antibacteriano efecto 15,16,23. Una amplia variedad de plantas medicinales usadas tradicionalmente no han sido aún investigado sistemáticamente contra diversos patógenos microbianos 24. Literatura búsqueda revela la realización de algunos estudios sobre la actividad antibacteriana y antifúngica de diferentes partes de esta planta, tales como corteza 23.25,26. hojas, raíces y frutos 15,27,28. Sin embargo, los estudios antimicrobianos contra patógenos causantes de infección en el oído son insuficientes. El presente estudio se llevó a cabo para validar el potencial antimicrobiano de hojas y corteza de T. arjuna contra las bacterias y hongos patógenos para los oídos aisladas de los pacientes locales de Kurukshetra y su comparación con el oído disponible localmente cae con el fin de buscar un extracto de la novela como una remedio para tratar las infecciones del oído. MATERIAL Y MÉTODOS La corteza y las hojas de Terminalia Arjuna se obtuvieron de los árboles junto a las carreteras de la Universidad de Kurukshetra, Haryana. La identidad taxonómica de esta planta fue confirmada por el Dr. B. D. Vashishta del Departamento de Botánica de la Universidad de Kurukshetra, Kurukshetra. La extracción de material de la planta Las muestras se lavaron cuidadosamente con agua corriente, seguido de agua destilada estéril y se secaron al aire a temperatura ambiente (40 ° C) durante 4-5 días y luego se homogeneizó a un polvo fino usando un molinillo de mezclador esterilizado y se almacena en botellas herméticas . Cuatro solventes diferentes a saber, etanol, metanol, acetona y acuosa (fría y caliente) se utilizaron para la extracción. Una cantidad de 10 g de corteza y hojas homogeneizado se empapó separadamente en matraces cónicos de cada containing100 ml de acetona, etanol, metanol (95) y agua destilada estéril. También la misma cantidad (es decir, 10 g) de la corteza y las hojas se homogeneizaron se sumergieron por separado en 100 ml de agua destilada estéril caliente en frascos cónicos y se dejó reposar durante 30 minutos en un baño de agua con agitación ocasional seguido manteniendo todos los matraces en un agitador rotatorio a 200 rpm durante 24 h 29-31. Cada preparación se filtró a través de un papel de filtro Whatman Nº 1 esterilizada y finalmente se concentró a sequedad al vacío a 40 ° C utilizando rotaevaporator. El extracto seco obtenido de este modo se esterilizó por noche irradiación UV y se comprobó la esterilidad en placas de agar de nutrientes y se almacena a 4ºC en botellas estériles etiquetados hasta su uso ulterior 14,32. Cinco bacterias a saber, Staphylococcus aureus (HM626197) (Gram-positiva), Acinetobacter sp. (HM626198), Proteus mirabilis (HM626199), Escherchia coli (HM626200), Pseudomonas aeruginosa (HM626201) (Gram-negativas) y una levadura, Candida albicans utilizados en este estudio, fueron aisladas de los pacientes que tienen infección de oído de las clínicas ORL locales de Kurukshetra. Las cepas bacterianas fueron identificados sobre la base de la tinción, bioquímicos y las características moleculares (16S rRNA de secuenciación) 33 y la levadura sobre la base de la tinción, las características morfológicas y de cultivo 5,34,35. Las cepas bacterianas se subcultivaron en agar nutritivo y la levadura en agar de levadura de malta y se incubaron aeróbicamente a los medios de comunicación 37C. The fueron adquiridos a Hola Laboratorio de Medios Pvt. Ltd. de Bombay, India. Tres gotas para los oídos comúnmente prescritos por otorrinolaringólogo, dos Ciplox alopática (antibacteriano), Franco (antimicótico), y una caída de hierbas oído Bilwa Tel (antimicrobiano), utilizado en este estudio, fueron adquiridos en el mercado local de Kurukshetra. La detección de la actividad antimicrobiana La acetona, metanol, etanol, T. acuosa caliente y fría las hojas Arjuna y extractos de corteza fueron utilizados para la evaluación de la actividad antimicrobiana por el método de difusión en agar 36,37. En este método, aislado puro de cada microbio se subcultivó en las placas de los medios de agar a 37ºC durante 24 h. Una placa de cada microorganismo fue tomada y un mínimo de cuatro colonias se tocó con un asa estéril y se transfiere a solución salina normal (0.85) en condiciones asépticas. Densidad de cada suspensión microbiana se ajustó igual a la de 10 6 ufc / ml (normalizados por 0.5McFarland estándar) y se utilizó como inóculo para realizar un ensayo de difusión en pocillo de agar. Cien microlitros (volumen 100 l de cada extracto fue propulsado directamente en los pozos (por triplicado) de la inocularon placas de agar para cada organismo prueba. Se dejó que las placas en reposo durante 1 hora para la difusión del extracto en el agar y se incubaron a 37ºC durante 24h. 32,39. estéril DMSO (20) sirvió como control negativo y ciplox (para las bacterias), cándida (para los hongos) y tel Bilwa (antimicrobiano) gota oído sirvió como control positivo. la actividad antimicrobiana, indicado por una inhibición zona que rodea el pocillo que contiene el extracto, se registró si la zona de inhibición se se realizaron mayor que 8 mm 40. los experimentos por triplicado y se calcularon los valores medios del diámetro de las zonas de inhibición con la desviación estándar. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (MIC ) MIC para cada organismo de ensayo se determinó siguiendo el modificado agar método de difusión bien. a de diluciones dobles en serie de cada extracto se preparó por primera reconstituir el extracto se secó (100 mg / ml) en 20 DMSO seguido de dilución en agua destilada estéril (1 : 1) para lograr un intervalo de concentración decreciente de 50 mg / ml a 0.39mg / ml. A 100 8mm), se registró para cada organismo de ensayo 32, 37,41, 42. Todos los datos se presentan como media (desviación estándar). Los resultados fueron evaluados estadísticamente mediante Dennetts T-test. valor de p inferior a 0,01 se consideraron significativos. La actividad antibacteriana de T. corteza Arjuna y deja extractos sobre las placas de agar variaron en diferentes disolventes. De los diez extractos seleccionados para la actividad antifúngica, ninguna de las extracto mostró la producción de la zona de inhibición contra Candida albicans que carecen de este modo la actividad antifúngica. Los controles positivos producidos zonas de inhibición de tamaño significativamente contra las bacterias y la levadura ensayadas, sin embargo, el control negativo no produjeron efecto inhibitorio observable contra cualquiera de los organismo de ensayo (Tabla 1). Una lectura de los datos de la Tabla 1 revela que todos los seis extractos en disolventes orgánicos de las dos hojas y la corteza poseían actividad antibacteriana contra los cuatro agentes patógenos bacterianos, de los cinco patógenos probados. El extracto de hoja de acetónica se encontró que era más eficaz contra Staphylococcus aureus (28 mm) (Figura 1), seguido de Proteus mirabilis (27,6 mm), Acinetobacter sp (16.6mm) y Pseudomonas aeruginosa (16 mm). Las zonas Inhibición producidos por el extractos metanólicos y etanólicos contra S. aureus y P. mirabilis oscilaron entre 24.6mm y 26,3 mm. S. aureus y P. mirabilis se encontró que eran patógenos más sensibles que sobrevivieron hasta 1,56 mg / ml y 3,12 mg / ml (Tabla 2), lo que tiene un MIC de 3,12 mg / ml y 6,25 mg / ml, respectivamente. La zona de inhibición producida por los extractos de hojas orgánicos contra P. aeruginosa y Acitenobacter sp. oscilado entre 15mm y 16.6mm. P. aeruginosa y Acitenobacter sp. se encontró que eran relativamente menos sensibles, ya que sobrevivieron hasta 25 mg / ml (metanólicos y etanólicos extractos) y 12,5 mg / ml (extracto de acetona) que tiene por lo tanto una MIC de 50 mg / ml y 25 mg / ml, respectivamente. No se observó actividad antibacteriana en extractos de hojas acuosos y orgánicos contra E. coli. Entre los extractos de corteza de prueba, todos los cinco extractos en disolventes (orgánica y acuosa) mostraron actividad antibacteriana contra S. aureus con mayor zona de inhibición en el extracto acuoso caliente (27,6 mm), seguido de extracto acuoso frío (26,3 mm) (Figura 2), extracto de etanol (26 mm), metanol y extractos de acetona (23 mm). S. aureus fue nuevamente se encontró que el patógeno más sensible que sobrevivió hasta la concentración más baja ie0.78 mg / ml en agua caliente, agua fría y extractos de etanol (Tabla 2), teniendo así una CIM de 1,56 mg / ml, seguido por el metanol y acetónica extrae 3 mg / ml. Las zonas de inhibición producida por los tres disolventes orgánicos contra Acitenobacter sp. oscilado entre 16.3mm y 17mm. Acitenobacter sp. era relativamente menos sensibles, ya que sobrevivió hasta 12,5 mg / ml, lo que tiene un MIC de 25 mg / ml. La zona de inhibición producida por los extractos de corteza de disolvente orgánico contra P. mirabilis y Escherichia coli era casi igual y varió entre 14,6 mm y 16.3mm. P. mirabilis sobrevivieron hasta 12,5 mg / ml (acetona) y 25 mg / ml (metanol y etanol), teniendo así una MIC de 25 mg / ml y 50 mg / ml, respectivamente, mientras que E. coli sobrevivieron hasta 25 mg / ml (etanol y acetona ) y 12,5 mg / ml (metanol) que tienen por lo tanto una MIC de 50 mg / ml y 25 mg / ml, respectivamente. extractos de corteza, tanto orgánicos como acuosos, sin embargo, carecían de actividad antibacteriana frente a P. aeruginosa. Todos los resultados obtenidos son estadísticamente significativas, ya que mostraron (p 0,001) en comparación con el control. Los extractos orgánicos de T. Arjuna hojas poseen una buena actividad contra los cuatro agentes patógenos bacterianos del oído decir, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Acitenobacter sp. y no muestra ninguna actividad contra E. coli. Curiosamente, el extracto de corteza también mostraron una buena actividad biológica contra los cuatro agentes patógenos bacterianos del oído, sin embargo, P. aeruginosa no se encontró sensible a los extractos de corteza. La actividad antifúngica frente a C. albicans fue totalmente ausente en los extractos de hojas y de la corteza Arjuna T. tanto orgánica y acuosa. En el estudio anterior, los extractos de raíz de esta planta se había demostrado que poseen actividad contra Aspergillus niger y Candida albicans 27. Las hojas acuosas y extractos de corteza de T. arjuna carecido de actividad antifúngica frente a C. albicans y la actividad antibacteriana contra las bacterias ensayadas, excepto una bacteria Gram positiva, S. aureus que se encontró sensible tanto a los extractos de corteza acuosas calientes y fríos. El espectro limitado de actividad antimicrobiana en los extractos acuosos puede ser debido a tres razones: en primer lugar la polaridad de compuestos antibacterianos que sean más fácilmente extraídos por disolventes orgánicos en comparación con extracto acuoso compuesto en segundo lugar activo puede estar presente en cantidad insuficiente en el extracto crudo a muestran actividad con el nivel de dosis empleada y en tercer lugar, si el principio activo está presente en altas cantidades, podría haber otros componentes presentes en el extracto ejerciendo efectos antagonistas de los compuestos bioactivos 43. de los tres extractos orgánicos de hojas observados, el extracto de acetona tiene ha encontrado que tienen una mejor actividad antibacteriana de los extractos etanólicos y metanólicos correspondientes (Tabla 1) sustituyendo de este modo los resultados de los trabajadores anteriores 11,37,44,45 que clasificaron acetona como el mejor disolvente. La actividad antibacteriana exhibida por T. Arjuna hojas y extractos de corteza contra los patógenos bacterianas del oído puede ser debido a la presencia de metabolitos secundarios, tales como ácido arjunic, arjungenin. arjunetin y luteolina que se han informado de que los antimicrobianos en la naturaleza 15,16,23. Este estudio revela que tanto las hojas como los extractos orgánicos de la corteza de T. arjuna tienen actividad antibacteriana de amplio espectro contra los patógenos del oído como se visualiza por la formación de zonas de inhibición de las bacterias Gram positivas y Gram. Curiosamente, todos los extractos orgánicos de esta planta mostró mucho más potente actividad contra las bacterias del oído probados que el de caída estándar a base de hierbas del oído (Bilwa tel) por lo tanto tener un gran potencial para desarrollarse como gotas para los oídos a base de hierbas para el control de las infecciones bacterianas del oído. Nuestros resultados nos permiten concluir que, todos los extractos T. arjuna analizadas (en cualquiera de la preparación-acetona probado, etanol o metanol) han mostrado una buena actividad tanto contra los patógenos en el oído negativa Gram positivas y Gram, siendo la mayor inhibición en bacterias Gram bacterias positivas que los bacteriano. Este Gram negativas, probablemente explica el uso de esta planta por los indígenas contra una serie de infecciones desde generaciones. A partir de ahora, poco se ha hecho en la actividad antimicrobiana y aplicaciones medicinales plausibles de los compuestos fitoquímicos y, por tanto, extensas investigaciones son necesarias tales como estudios in vivo en esta planta necesaria para determinar la toxicidad de los componentes activos, sus efectos secundarios, propiedades farmacocinéticas para explotar los principios bioactivos, para utilidad terapéutica en el tratamiento de las infecciones del oído. Las actividades antibacterianas pueden mejorarse si los componentes activos se purificaron y se determinó la dosis adecuada para una correcta administración. Por fin, la necesidad de la hora es el desarrollo de un phyto efectiva en un producto a base de hierbas explotables, que carece de efectos secundarios y problemas resistencia a los medicamentos. 1. Puertas GA. Consideración del tratamiento otitis media. Otolaryngol Head Neck Surg. 1996114 (4): 525-30. 2. Roland PS, Stroman DW. Microbiología de la otitis externa aguda. Larygoscope. 2002112 (7 Pt 1): 166-77. 3. Rosenfeld RM, Marrón L, Cannon RC, Dolor JR, Ganiats GT, Hannley M, et al. Guía de práctica clínica: la otitis externa aguda. Fundación Americana Neck Surgery Acad Otorrinolaringología-Cabeza y. 2006134 (4 Suppl): S4-S23. 4. Dhingra PL. Las enfermedades del oído, nariz y garganta. 4ª ed. Nueva Delhi: Reed Elsevier India. Private Limited 2007. 5. Aneja KR, Sharma C, infección por hongos R. 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Enviar correspondencia a: Chetan Sharma Departamento de Microbiología de la Universidad de Kurukshetra Kurukshetra - 136 119, Haryana, India E-mail: chetanmicro147gmail. com Mob: 91 9812287101 Documento presentado a la BJORL-SGP (Sistema de Gestión de las Publicaciones - Revista Brasileña de Otorrinolaringología) de septiembre 8, 2010 y aceptada el 20 de febrero de 2011. bacalao. 7312 Secuencia de nucleótidos de todos los cinco bacterias se han presentado al GenBank base de datos, que han proporcionado el número de acceso de GenBank, HM626197-HM626201. Sede da Associao Brasileira de Otorrinolaringologia e Cirurgia Crvico Av facial. Indianpolia, 1287 04063-002 São Paulo / SP Brasil Tel. (0xx11) 5053-7500 Fax: (0xx11) 5053 a 7512 revistaaborlccf. org. br
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